无菌接种操作 — 微生物斜面接种操作要点
发布时间：2024-10-23 浏览次数：558
接种是微生物检验技术的最基本操作，微生物的传代和扩大培养都需要接种或移种。接种是指将微生物接到适合其生长的营养物上使微生物繁殖的操作。
移种是指将已培养好的培养物转接到新鲜的培养基中，使其进一步扩大培养和生长繁殖的操作。接种工具常用的有接种针、接种环、移液管等。
接种过程是一个无菌过程，接种工具、接种环境以及培养基都应该保证无菌。
今天我们介绍一下斜面直接接种的操作，具体操作如下：
一、斜面划线
具体操作见下图：
1）将菌种管和待接种斜面试管握在左手中，试管底接触掌心。斜面一面向上，并处于接近水平位置。
2）先菌种和待接种斜面试管的棉塞旋转一下，以便接种时易于拔出。右手以拿笔或拿毛笔的姿势捏住接种环金属柄，将要伸入试管部分的金属柄和金属丝在酒精灯火焰外焰上灼烧灭菌。
3）用右手小指、无名指和手掌下沿将两管的棉塞同时夹住并拔出，棉塞不得接触任何物品，更不得放在桌面上。
4）再将两个试管口在火焰上灼烧。将灼烧过的接种环伸入接种管内。使接种环在试管内壁上冷却，然后用接种环在菌苔上刮取少许后抽出，抽出时勿与试管壁相碰，也不要通过火焰。
5）迅速将粘有菌种的接种环伸入待接种斜面试管内，自斜面底部向上往复“之”字划线，注意不要划破琼脂。
6）划线完毕后将接种环抽出，灼烧管口，塞上棉塞。塞棉塞时勿用试管口去迎棉塞，以免试管离开火焰周围无菌环境时污染杂菌。检查试管塞是否塞紧后将其放于试管架上。火焰灼烧接种环。
二、斜面穿刺
这里提到的斜面穿刺是指固体高斜面穿刺，如下图。
这是把目标菌苔通过接种针接种到固体培养基内部和斜面上的一种接种方法。沙门氏穿刺接种三糖铁斜面的操作就属这种情况。穿刺固体培养基是为了观察细菌在深层培养基中生长和代谢的情况。
操作时用笔直的接种针，从长有目标菌的培养基上挑取少量菌苔。将接种针平稳刺入培养基，勿触到管底（距离试管底部大约2mm~3mm），也不可碰到试管内壁，然后沿原穿刺途径慢慢抽出接种针，最后在斜面上进行“之”字划线。
这里需要特别注意的是：斜面划线和穿刺操作一定针对纯培养物，否则实验操作是无意义的。划线或穿刺的目的是为了将纯培养物二次传代培养。这种操作也见于标准菌株复壮或传代。整个操作过程中要严格规范操作，严格控制交叉污染。
文章来源：“食品微生物检测”公众号；
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