细胞铺板时如何铺出合格的板子?
发布时间:2022-07-28 浏览次数:3873
做贴壁细胞的实验,经常需要做细胞铺板。细胞铺板的好坏决定了后续实验的成败,这个实验看似简单,其实也不是那么好做,其中关键是要铺得均匀铺得平整,其中的操作蕴含着丰富技巧。
(图)细胞不均匀铺板 | (图)细胞均匀铺板 |
要铺出一个好的板子,必须要做到一下几点:
1、单细胞重悬
贴壁细胞培养完成后需要将细胞消化收集,并获得单细胞悬液,但这时候即便消化下来也会连在一起了。这时我们需要注意:消化细胞需要选择适用的消化液、适当的消化温度和时间;消化后需要轻轻拍打细胞贴壁面,震落细胞;少量培养基重悬,并用移液器反复吹散细胞。做到这几点后获得细胞悬液基本是单细胞悬液。
2、一步完成
获得细胞悬液后要先根据选择的培养板的种类,以及要种的细胞密度调整细胞悬液的浓度,可在离心管中调整后反复颠倒摇匀,种板需要一步完成,切不可先加细胞后补液或先加液再补细胞。
3、十字摇匀
细胞种板后将悬液铺满整个底面,为防止来回走动导致细胞局部不均匀,放置细胞培养箱内做十字摇匀,摇匀后就不能再移动,直到细胞贴壁方可。
以下为一般培养时不同载体的推荐使用方法
总结:细胞铺板需要做到细胞均匀分布,密度适中。正确的铺板需要获得单细胞悬液,正确地调整密度,一步到位种植到培养板,通过十字摇法使细胞均匀分布。